生物发光是一种在开展遗传报告基因检测时的卓越的检测方法。
目前,最常用的基因检测方法是萤火虫萤光素酶,但研究人员发现,他们也需要一些较小且不需要ATP的报告基因,于是诸如桡足类萤光素酶等其他萤光素酶的使用也逐渐增多。海肾萤光素酶就是其中的最佳代表。
海肾萤光素酶来源于海肾(Renilla reniformis)。这种酶只有36 kDa,几乎是萤火虫萤光素酶的一半(61 kDa),且不需要ATP。Promega公司以此为基础,开发出了全新的Renilla-Glo™萤光素酶检测系统。它将便捷的“加样、混合、检测”的操作模式带入使用海肾(Renilla reniformis)萤光素酶的实验中。
与传统的萤火虫萤光素酶相比,该检测方法更适合较小分子报告基因的应用实验,是此类筛选的理想工具。延长的信号半衰期以及低背景的化合物支持其用于在很多筛选项目中常见的高密度平板模式。
Renilla -Glo™萤光素酶检测系统仅需一个加样步骤,即可在萤光素酶作用下产生辉光型信号。制成溶液后,该试剂可裂解细胞,从而减少腔肠素底物的自发萤光,以产生稳定信号(如22℃半衰期大于60分钟)。
这种“加样、混合、检测”的操作模式使得海肾萤光素酶报告基因系统的检测变得非常简单。无需分别进行裂解及试剂加样,能改善检测精度。光信号明亮,持续时间更长,为批量和连续处理做了优化,而低背景模式更是增加了灵敏度。
此系统可应用在多方面研究中,如转录调控、病毒-细胞相互作用、化合物筛选、转录后修饰、GPCR信号、细胞信号及启动子分析中。
Promega提供了多种pGL4海肾萤光素酶载体。这些载体多数不含有真核启动子,但在海肾荧光素酶基因的上游含有多克隆位点。部分载体含有SV40、CMV或HSV启动子,可组成型表达海肾萤光素酶。
除了Renilla-Glo™萤光素酶检测系统,Promega还提供了双萤光素酶报告基因检测系统。它可在一个系统中用于测量两个单独的萤光素酶报告基因,萤火虫萤光素酶及海洋海肾萤光素酶。一般地说,实验报告基因用于检测实验条件下基因的表达,而另一个报告基因作为内对照,以提供实验报告基因检测的归一化。将实验报告基因的活力与内对照报告基因的活力作归一化可消除实验中不同检测间的固有变化。在双萤光素酶报告基因检测中,萤火虫萤光素酶作为实验报告基因,而海肾萤光素酶作为对照报告基因。